真菌作为自然界第二大类生物，是天然药物创制的重要来源。然而，大量真菌基因组测序表明，真菌中超过90%的次级代谢产物合成基因簇处于沉默状态，极大地限制了新代谢产物的发现及其合成机制研究。中国科学院微生物研究所真菌学国家重点实验室研究员尹文兵课题组针对真菌中大量“隐秘”基因簇的问题，杏耀注册长期从事从基因到次级代谢产物的研究，主要方向包括真菌次级代谢产物激活、生物合成及其调控机制研究，近一年来取得了三个具有系统性和原创性的成果。

 

“这三个成果是天然产物发现及后续改造利用的上游和下游的关系。”尹文兵解释。

 

第一个成果是使用表观遗传策略挖掘真菌天然产物多样性。他们通过对植物内生真菌无花果拟盘多毛孢中的表观遗传调控因子进行定向遗传敲除，发现该菌的次级代谢产物指纹图谱发生了巨大变化，从中分离鉴定得到了15个新的聚酮类天然产物，并通过同位素示踪法阐释了产物Ficiolide A的合成途径。

 

“我们通过对遗传转化技术进行改良，大大缩短了真菌转化的周期，该研究为新天然产物的发现提供了高效的方法。”助理研究员吴广畏为文章的第一作者，尹文兵为文章通讯作者。

 

在此基础上，科学家们开展了生物合成机制研究，阐明重要生防菌淡紫拟青霉中脂肽类抗生素leucinostatins的生物合成途径。

 

在与中国农业科学研究院蔬菜花卉研究所研究员谢丙炎课题组的合作下，科学家们通过对淡紫拟青霉进行基因组测序并结合比较基因组学分析， 杏耀平台的体会，预测了脂肽类抗生素leucinostatins的合成基因簇。再通过对候选基因的遗传敲除，鉴定了leucinostatins的合成基因簇，并且解析了其合成途径。这一工作对防治植物线虫等多种病虫害药物的开发奠定了理论基础。

 

此后，尹文兵又和北京大学药学院叶敏团队合作，率先将真菌糖基转移酶应用于天然产物成药性改善。

 

利用糖基化对活性天然产物修饰是改造其成药性的一个有效手段，目前常常利用真菌作为宿主进行生物转化来获得，但至今还未从真菌中发现起作用的糖基转移酶。他们则利用生物转化导向的转录组测序技术从冻土毛霉中发现并鉴定了第一个糖基转移酶，并成功表达获得可溶性蛋白质。研究发现，该酶具有广泛的底物杂泛性和专一的立体选择性，主要以二磷酸尿苷葡糖为糖基供体，可接受73个酚类物质为主的药物骨架化合物作为底物，进行氧糖基化反应，杏耀代理主产物的产率可达到60%以上。值得关注的是该酶对于含有异戊烯基的酚类底物的催化活性具有独有的专一性，糖基化的位置主要发生在异戊烯基邻位的羟基基团上，说明该酶催化的复杂性。