“定向进化”是指科学家在实验室中为细胞生物学、生理学和生物医学量身定做蛋白质的过程。基于这种方法,杏耀注册来自Martinsried的Max Planck研究人员现在已经开发出一种直接在哺乳动物细胞中优化蛋白质的方法。利用这种新方法,科学家们已经生产出了荧光蛋白mCRISPRred,它在溶酶体中发出明亮的荧光——溶酶体是一种酸性很强、完全可分解的细胞囊泡——这在以前是很难标记的。
在蛋白质的定向进化过程中,会产生大量初始蛋白质的微小变异。这为以后的生物医学研究创造了一个巨大的潜在候选池。在第二步中,研究人员选择具有改进的、想要的特性的蛋白质变体。合适的候选蛋白的鉴定在试管或微生物细胞中进行。总的来说,这个过程对于许多应用程序来说是非常成功的。然而,在哺乳动物细胞或细胞器的特定条件下发挥作用的蛋白质变体很难用这种方法识别。
一起同事邻近的马克斯普朗克研究所的生物化学,奥利弗Griesbeck的小组的研究人员开发了一种新的CRISPR-Cas9基础,方法指导蛋白质进化:“我们的技术无关的基因组编辑CRISPR众所周知,“Arne Fabritius解释说,一分之二的该研究的作者之一。“我们用这种方法在特定位置分离DNA链。修复机制的错误会导致遗传多样性,而这直接发生在活的哺乳动物细胞中。”
新方法将所需蛋白质的基因作为单一拷贝引入细胞基因组。在这里,它被稳定地嵌入,并在细胞分裂时传递给子细胞。使用CRISPR-Cas9基因剪刀,研究人员能够在插入的蛋白质基因的特定位置进行切割。通过添加特殊的构建块,在修复伤口的过程中出现的计划错误可以导致改变,如果幸运的话,还可以改进原始蛋白质的变体。
通过这种方式,来自Martinsried的研究人员开发出了mCRISPRed蛋白质,杏耀开户这种蛋白质在溶酶体的酸性酸碱度下会发出更强的荧光,比之前设计的所有蛋白质都更加健壮。
溶酶体是细胞的废物处理细胞器。它们的酸性pH值几乎溶解了它们接触到的所有东西。很长一段时间以来,研究人员一直在寻找一种方法,将明亮的荧光蛋白引入溶酶体,以便标记它们,从而改进对细胞内的研究。
新开发的蛋白质mCRISPRed表明,
杏耀代理 ,蛋白质的特性甚至可以适应非常特殊的条件,例如溶酶体的条件。“CRISPR-Cas9的新应用为促进生物传感器、受体、治疗蛋白或信号蛋白的发展开辟了完全不同的可能性,”Oliver Griesbeck兴奋地说。“对我来说,这绝对是蛋白质工程的下一步!”